Проведение процедуры выделения ДНК
Лизис1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить исследуемые образцы.2. В случае хранения образцов в физиологическом растворе центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего полностью удалить супернатант.3. Добавить к образцам 200 мкл лизирующего буфера 1, 30 мкл Протеиназы К, интенсивно перемешать на вортексе.Опционально: возможно использование РНКазы А любого производителя в концентрациях, рекомендованных производителем. 4. Инкубировать образцы в термостате при 56℃ в течение 2-5 часов, периодически встряхивая.5. Центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин., после чего перенести 200 мкл супернатанта в новые пробирки объемом 1,5-2 мл. 6. Внести 200 мкл лизирующего буфера 2, перемешать пробирки на вортексе и сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.Сорбция НК1. Добавить к смеси 200 мкл связывающего буфера и 50 мкл магнитных частиц, интенсивно перемешать пробирки на вортексе.2. Инкубировать в течение 3-5 минут при комнатной температуре, периодически встряхивая.3. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.4. Установить пробирки на магнитный штатив и инкубировать в течение 3-5 минут.5. Аккуратно, не задевая осадок, удалить супернатант.Промывка НК1. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1, интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.2. Инкубировать на магнитном штативе в течение 1-2 минут.3. Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.4. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2, интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.5. Инкубировать на магнитном штативе в течение 1-2 минут.6. Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.7. Повторить пункты 4-6.8. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ или при комнатной температуре до полного испарения промывочного раствора.Элюция НК1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.2. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая на вортексе.3. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.4. Инкубировать на магнитном штативе в течение 1-2 минут.5. Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц. Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.
вернуться в каталог товаров
