Набор для выделения ДНК из цельной крови «Blood N»

Raissol
5000,00
р.
КУПИТЬ СЕЙЧАС
Метод выделения ДНК из цельной крови классическим методом тотального спиртового осаждения нуклеиновых кислот - позволяет получить высокие концентрации нуклеиновых кислот для последующих приложений. Содержит модифицированный буфер для удаления красных клеток, который нарушает целостность белых клеток крови, не повреждая ядерную мембрану, за счет чего происходит потеря митохондриального генома, и, как следствие, более высокий процент ядерного генома в финальном растворе НК. Не рекомендуется использовать многократно замороженную кровь ввиду повреждения целостности клеток и, как следствие, потери ДНК на этапе удаления красных клеток. Допустимое замораживание крови – 1 раз. Происходит снижение выхода ДНК на 30-40% при однократном замораживании крови. Для работы с многократно замороженной кровью рекомендуем использовать набор Raissol® Blood Q.

Тип образца: Кровь

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    RBC буфер – предназначен для удаления эритроцитов крови;
2.    Лизирующий буфер – на основе лаурилсульфата натрия и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
3.    Осаждающий буфер 1 – для преципитации белков;
4.    Осаждающий буфер 2 – для преципитации НК;
5.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Промывочный буфер 2 - для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
7.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 300 мкл крови и добавить 900 мкл RBC буфера.
2.    Встряхнуть пробирки на вортексе.
3.    Инкубировать в течение 5-10 минут при комнатной температуре.
4.    Центрифугировать в течение 1 минуты при макс. об/мин (не менее 13 тыс. об/мин для настольных центрифуг), далее удалить супернатант.
5.    К полученному осадку клеток добавить 300 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К, интенсивно встряхнуть на вортексе до полного разрушения конгломерата клеток.
6.    Инкубировать в термостате при 55-60℃ в течение 15-25 минут, периодически встряхивая.
7.    Перенести пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания смеси.
Сорбция и осаждение НК
1.    Добавить к смеси 50 мкл осаждающего буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в течение 3-5 минут во льду или в холодном штативе. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести 300-330 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6.    Добавить 330 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью пятикратного переворачивания пробирки.
7.    Для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать пробирки в морозильной камере при -20℃ в течение 25 минут.
8.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2,3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "BloodN" (pdf)

Скачать полную инструкцию "BloodN" (pdf)

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «GM Blood N» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.

Необходимые материалы и оборудование

  1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
  2. Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  3. Автоматические дозаторы переменного объема на 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
  4. Вортекс;
  5. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  6. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин;
  7. Штатив-охладитель или ледогенератор.
Made on
Tilda