Набор для выделения нуклеиновых кислот из дрожжей "Yeaxt+"

Raissol
6000,00
р.
КУПИТЬ СЕЙЧАС
Метод выделения нуклеиновых кислот из дрожжей, основанный на комбинации 3х буферов для разрушения клеточной стенки и тотального лизиса, с последующей сорбцией НК на магнитном сорбенте. В набор включен фермент РНКаза А Raissolтм, деградирующий избыток РНК, свойственный дрожжам в стадии роста.

Тип образца: Дрожжи

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    White буфер – для ресуспендирования исследуемого образца;
2.    Blue буфер – на основе ионных ПАВ и вспомогательных компонентов для клеточного лизиса;
3.    Yellow буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для полного лизиса;
4.    Связывающий буфер – для повышения сорбции НК на магнитных частицах;
5.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
7.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
8.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
9.    РНКаза А – для удаления РНК;
10. Магнитные частицы – для сорбции НК.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 100 мкл White буфера и перенести пробы (размером со спичечную головку) с твердой питательной среды стерильным инструментом. В случае жидкой питательной среды, центрифугировать образцы при 8-13 тыс. об/мин и полностью удалить супернатант – количество осадка не должно превышать размер спичечной головки – и ресуспендировать конгломерат клеток в 100 мкл White буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Подготовить необходимый объем реагента из расчета 100 мкл Blue буфера и 10 мкл РНКазы А на 1 реакцию (например, 500 мкл Blue буфера и 50 мкл РНКазы А на 5 реакций).
4.    Внести 110 мкл подготовленного реагента в каждый образец, интенсивно перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение 3-5 минут, перемешивая образцы каждую минуту.
5.    Внести в образцы 200 мкл Yellow буфера, интенсивно перемешать и добавить 20 мкл Протеиназы К.
6.    Инкубировать пробирки в термостате при 56-60℃ в течение 30 минут, периодически встряхивая.
7.    Центрифугировать пробирки в течение 3 минут при 8-13 тыс. об/мин. Перенести супернатант в новые пробирки объемом 1,5-2 мл, не захватывая осадок.
Сорбция НК
  1. Добавить к смеси 200 мкл связывающего буфера и 50 мкл магнитных частиц.
  2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
  3. Инкубировать образцы при комнатной температуре в течение 5 минут, периодически перемешивая.
  4. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования и установить пробирки на магнитный штатив. Инкубировать в течение 3-5 минут.
  5. Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать на магнитном штативе в течение 1-2 минут, аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2-3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ в течение 10-15 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5-10 минут, периодически перемешивая.
4.    Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
5.    Инкубировать на магнитном штативе в течение 2-3 минут.
6.    Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "Yeaxt+" (pdf)

Скачать полную инструкцию "Yeaxt+" (pdf)

   

  

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «Yeaxt+» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.
Фермент РНКаза А хранится при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев.

Необходимые материалы и оборудование

  1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
  2. Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  3. Автоматические дозаторы переменного объема на 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
  4. Вортекс;
  5. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  6. Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  7. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин.
Made on
Tilda