Проведение процедуры выделения ДНК
Лизис1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 100 мкл White буфера и перенести пробы (размером со спичечную головку) с твердой питательной среды стерильным инструментом. В случае жидкой питательной среды, центрифугировать образцы при 8-13 тыс. об/мин и полностью удалить супернатант – количество осадка не должно превышать размер спичечной головки – и ресуспендировать конгломерат клеток в 100 мкл White буфера. 2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.3. Подготовить необходимый объем реагента из расчета 100 мкл Blue буфера и 10 мкл РНКазы А на 1 реакцию (например, 500 мкл Blue буфера и 50 мкл РНКазы А на 5 реакций).4. Внести 110 мкл подготовленного реагента в каждый образец, интенсивно перемешать и инкубировать при комнатной температуре в течение 3-5 минут, перемешивая образцы каждую минуту.5. Внести в образцы 200 мкл Yellow буфера, интенсивно перемешать и добавить 20 мкл Протеиназы К.6. Инкубировать пробирки в термостате при 56-60℃ в течение 30 минут, периодически встряхивая. 7. Центрифугировать пробирки в течение 3 минут при 8-13 тыс. об/мин. Перенести супернатант в новые пробирки объемом 1,5-2 мл, не захватывая осадок.Сорбция НК- Добавить к смеси 200 мкл связывающего буфера и 50 мкл магнитных частиц.
- Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
- Инкубировать образцы при комнатной температуре в течение 5 минут, периодически перемешивая.
- Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования и установить пробирки на магнитный штатив. Инкубировать в течение 3-5 минут.
- Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.
Промывка НК1. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 1.2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.3. Инкубировать на магнитном штативе в течение 1-2 минут, аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.4. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 2.5. Повторить пункты 2-3. 6. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ в течение 10-15 минут до полного испарения промывочного раствора.Элюция НК1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.3. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5-10 минут, периодически перемешивая.4. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.5. Инкубировать на магнитном штативе в течение 2-3 минут.6. Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц. Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.
вернуться в каталог товаров