Набор для выделения ДНК из эпителиальных клеток соскобов, мазков, клеточных намывов слюны и мочи Epi Q

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Связывающий буфер – для повышения сорбции НК на фильтре колонки;
3.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
4.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
6.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
7.    Спин-колонки – для фильтрации реакционной смеси и сорбции НК.

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить образцы.
2.    Добавить 350 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
3.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать в термостате при 55-60℃ в течение 10-15 минут, периодически встряхивая.
Примечание: время может быть увеличено до 30 минут для повышения выхода ДНК.
5.    Остудить смесь при комнатной температуре в течение 3-5 минут. Перенести максимально возможный объем полученного раствора в новую 1,5-2 мл пробирку.
Сорбция и осаждение НК
1.    Добавить к смеси 350 мкл связывающего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Перенести весь объем смеси в спин-колонку.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 1.
2.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
3.    Добавить в пробирки 600 мкл промывочного буфера 2.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
5.    Вернуть колонки в собирательные пробирки. Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при макс. об/мин.
Элюция НК
1.    Перенести спин-колонки в новые пробирки объемом 1,5-2 мл. Собирательные пробирки утилизировать.
2.    Добавить на центр мембраны спин-колонок 50-100 мкл элюирующего буфера. Инкубировать в течение 1-2 минут.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при макс. об/мин.
4.    Утилизировать спин-колонки.
Опционально: для повышения выхода НК фильтрат можно повторно нанести на мембрану колонки и/или использовать нагретый до 60-70℃ элюирующий буфер.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "EpiQ" (pdf)

Скачать полную инструкцию "EpiQ" (pdf)

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «GM Epi Q» могут храниться при температуре от +4 до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К хранится при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.