Набор для выделения ДНК из плазмы крови Cf Extra

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
3.    Ресуспендирующий буфер – для разрушения конгломерата частиц;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
8.    Магнитные частицы – для сорбции НК.

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 15 мл поместить 4,5 мл плазмы крови.
2.    Добавить 900 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
3.    Перемешать пробирки с помощью переворачивания.
4.    Инкубировать пробирки на водяной бане при 56-60℃ в течение 60-90 минут, перемешивая каждые 10-20 минут.
5.    Перенести пробирки на лед и инкубировать в течение 2-3 минут. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 10-15 минут до полного остывания пробирок.
Сорбция НК
1.    Добавить к смеси 9,6 мл связывающего буфера и 130 мкл магнитных частиц, хорошо перемешать.
2.    Инкубировать пробирки при комнатной температуре в течение 30 минут, перемешивая каждые 5-10 минут, либо установить на вращающийся ротор с минимальной скоростью.
Ресуспендирование
1.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при макс. об/мин, после чего удалить супернатант.
2.    Добавить к каждому осадку 850 мкл ресуспендирующего буфера и разрушить конгломерат частиц с помощью пипетирования.
3.    Перенести суспензию в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
4.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 5 минут.
5.    Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 900 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 3 минут, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4.    Повторить пункты 1-3.
5.    Добавить в пробирки 900 мкл промывочного буфера 2.
6.    Повторить пункты 2,3.
7.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ в течение 5 -10 минут либо при комнатной температуре в течение 20 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать на магнитном штативе в течение 3 минут.
5.    Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. Показатели полученных растворов ДНК соответствуют диапазону концентраций 0,3-1 нг/мкл при измерении с помощью набора Spectra Q HS (RaissolTM, Россия) на приборе Qubit (Thermo Fisher Scientific, США). Спектр размера устанавливается с помощью электрофореза на приборе Caliper (Perkinelmer, США). Стандартный диапазон 160-200 п.н.

Скачать краткую инструкцию "CFExtra" (pdf)

Скачать полную инструкцию "CFExtra" (pdf)

    

   

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «CF Extra» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Фермент Протеиназа К хранится при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.