Проведение процедуры очистки ДНК
Подготовка пробы (гель)1. Вырезать участок геля с нужным фрагментом ДНК и поместить его в предварительно взвешенную пробирку, далее взвесить пробирку с пробой и высчитать разницу. Вес геля в мг приравнивается к его объему в мкл (1 мг геля = 1 мкл геля).2. В пробирку добавить 3 объема связывающего буфера (от объема геля), но не менее 300 мкл.3. Инкубировать смесь в термостате при 55-58℃ до полного растворения геля, периодически перемешивая на вортексе.Опционально: для фрагментов ДНК менее 500 п.н. после растворения геля внести в реакцию 1 объем изопропанола (от объема геля) и перемешать. Далее перейти к этапу сорбции и промывки.Подготовка пробы (реакционная смесь)1. Если объем РС составляет менее 25 мкл, то необходимо довести его до 50 мкл водой или ТЕ-буфером и принять данный объем за основной. К объему РС добавить 3 объема связывающего буфера, перемешать.Опционально: для фрагментов ДНК менее 500 п.н. внести в реакцию 2 объема изопропанола (от объема РС). Далее перейти к этапу сорбции и промывки.Сорбция и промывка НК1. Переместить весь объем смеси в спин-колонку.2. Центрифугировать в течение 30 секунд при 10-13 тыс. об/мин, удалить фильтрат из собирательной пробирки.3. Добавить в спин-колонку 750 мкл промывочного буфера.4. Центрифугировать в течение 30 секунд при 10-13 тыс. об/мин, удалить фильтрат из собирательной пробирки.5. Центрифугировать спин-колонку в течение минуты при 10-13 тыс. об/мин.6. Переместить спин-колонку в новую пробирку 1,5-2 мл. Собирательную пробирку утилизировать.Элюция НК1. Добавить на центр мембраны спин-колонки 50-100 мкл элюирующего буфера.2. Инкубировать в течение 3-10 минут при комнатной температуре.3. Центрифугировать в течение 30-60 секунд при 10-13 тыс. об/мин.4. Утилизировать спин-колонки.Опционально: для повышения выхода НК фильтрат можно повторно нанести на мембрану колонки и/или использовать нагретый до 60-70℃ элюирующий буфер.Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.
вернуться в каталог товаров
