Набор для выделения ДНК из ткани животных «Tissue»

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе лаурилсульфата натрия и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Стабилизатор – для оптимального лизиса;
3.    Осаждающий буфер 1 – для преципитации белков;
4.    Осаждающий буфер 2 – для преципитации НК;
5.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
7.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8.9;
8.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса.

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить исследуемые образцы. В случае хранения образцов в физиологическом растворе центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 000 об/мин, после чего полностью удалить супернатант.
2.    Добавить 450 мкл лизирующего буфера, 20 мкл Протеиназы К и 2 мкл Стабилизатора.
Опционально: возможно использование РНКазы А любого производителя в концентрациях, рекомендованных производителем.
3.    Инкубировать образцы в термостате при 60℃ не менее 3-x часов. Рекомендуется инкубировать образцы в течение ночи для более полного лизиса ткани и большего выхода НК.
4.    Перенести пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания смеси.
Сорбция и осаждение НК
1.    Добавить к смеси 75 мкл осаждающего буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в течение 3-5 минут во льду или в холодном штативе. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести 500 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6.    Добавить 500 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью пятикратного переворачивания пробирки.
Опционально: для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать образцы в морозильной камере при -20℃ в течение 25 минут.
7.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант, не задевая осадок.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2,3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в термостате при 55-60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая на вортексе.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "Tissue" (pdf)

Скачать полную инструкцию "Tissue" (pdf)  

  

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «GM Tissue» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев c даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при пониженных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Стабилизатор необходимо хранить при температуре от +2℃ до +4℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.