Набор реагентов для выделения ДНК из семян, муки и проростков «SeedExt»

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе детергента и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Связывающий буфер – для повышения сорбции НК на фильтре колонки;
3.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей
4.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
8.    Спин-колонки – для фильтрации реакционной смеси и сорбции НК.

Проведение процедуры выделения ДНК

Пробоподготовка
1.    Этап пробоподготовки образца отличается в зависимости от вида биоматериала:
При работе с мукой:
1.a.    Внести в пробирку объемом 1,5-2 мл 50 мг навески образца, добавить 500 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
При работе с семенами:
1.b.   Измельчить образцы до состояния муки мелкого помола. Внести в пробирку объемом 1,5-2 мл 50 мг навески, добавить 500 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
При работе с проростками:
1.c.    Поместить навеску 15-50 мг зеленой части проростка в пробирку объемом 1,5 мл и интенсивно перетереть образец с помощью специального пестика для 1,5 мл микроцентрифужных пробирок до гомогенного состояния. Добавить 500 мкл лизирующего буфера. Внести 20 мкл Протеиназы К.
Примечание: При работе на автоматическом гомогенизаторе требуемая навеска образца помещается в специальную 1,5-2 мл пробирку с керамическими или металлическими бусинами для гомогенизации. Интенсивность программы гомогенизации должна быть щадящая, не допуская перегревания образцов.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
Лизис
1.    Инкубировать образцы в термостате при 56-60℃ в течение 1-2 часов, периодически встряхивая.
Опционально: за 10 минут до окончания лизиса возможно использование РНКазы А любого производителя в количестве, рекомендованном производителем.
2.    Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 3 минут. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 10 минут до полного остывания смеси.
Сорбция НК
1.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
2.    Перенести 300 мкл супернатанта в новые пробирки объемом 1,5 мл.
3.    Добавить 300 мкл связывающего буфера, интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Перенести весь объем смеси в спин-колонку.
5.    Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 650 мкл промывочного буфера 1.
2.    Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
3.    Добавить в пробирки 650 мкл промывочного буфера 2.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
5.    Добавить в пробирки 650 мкл промывочного буфера 3.
6.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 13 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
7.    Повторить п 5-6.
8.    Вернуть колонки в собирательные пробирки. Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при макс. об/мин.
Элюция НК
1.    Перенести спин-колонки в новые пробирки объемом 1,5-2 мл. Собирательные пробирки утилизировать.
2.    Нанести на мембрану спин-колонок 50-100 мкл элюирующего буфера. Инкубировать в течение 5 минут.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при макс. об/мин.
4.    Утилизировать спин-колонки.
Опционально: для повышения выхода НК фильтрат необходимо повторно нанести на мембрану колонки и/или использовать нагретый до 60-70℃ элюирующий буфер.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "SeedExt" (pdf)

Скачать полную инструкцию "SeedExt" (pdf)

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «SeedExt» могут храниться при температуре от +4 до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.

1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
2. Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
3. Автоматические дозаторы переменного объема на 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
4. Спин-колонки с собирательными пробирками (идут в комплекте);
5. Вортекс;
6. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
7. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин;
8. Аналитические весы с точностью взвешивания 0,1 мг;
9. Пестик для гомогенизации в 1,5 мл пробирках.

Примечание: при гомогенизации образцов в фарфоровой ступке с пестиком необходимо использовать набор «SeedExt+».