Набор для выделения ДНК из амниотической жидкости «Amex»

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:

1.    Лизирующий буфер – на основе лаурилсульфата натрия и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Осаждающий буфер 1 – для преципитации белков;
3.    Осаждающий буфер 2 – для преципитации НК;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса.

Скачать краткую инструкцию "Amex" (pdf)

Скачать полную инструкцию "Amex" (pdf)

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
2.    Центрифугировать пробирки в течение 3 минут при 13 тыс. об/мин, далее, не задевая осадок, удалить супернатант.
3.    К полученному осадку добавить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
4.    Повторить пункт 2.
5.    К полученному осадку клеток добавить 300 мкл лизирующего буфера и 15 мкл Протеиназы К, интенсивно встряхнуть на вортексе до полного разрушения конгломерата клеток.
6.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 25 минут, периодически встряхивая.
7.    Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
8.    Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания пробирок.

Сорбция и осаждение НК

1.    Добавить к смеси 50 мкл осаждающего буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в течение 3-5 минут на льду или в холодном штативе, периодически перемешивая образцы. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести 300-330 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6.    Добавить 330 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью многократного переворачивания пробирки.
Опционально: для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать пробирки в морозильной камере при -20℃ не менее 25 минут.
7.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.

Промывка НК

1.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2,3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.

Элюция НК

1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая на вортексе.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «Amex» могут храниться при температуре от +4 до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.