Набор для выделения ДНК из амниотической жидкости «Amex»

Raissol
4200,00
р.
Метод выделения ДНК из амниотической жидкости классическим методом тотального спиртового осаждения нуклеиновых кислот. В метод введены модификации для повышения выхода количества нуклеиновых кислот ввиду малого количества клеток, получаемых из амниотической жидкости методом центрифугирования. Намыв клеток из амниотической жидкости может производиться необходимое количество раз, последовательно. Для повышения выхода НК рекомендуем воспользоваться соосадителем Raissol®, разработанным для спиртового осаждения НК, позволяющим не только повысить финальное количество, но и облегчить визуализацию осажденных НК на этапах промывок.

Тип образца: Амниотическая жидкость

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:

1.    Лизирующий буфер – на основе лаурилсульфата натрия и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Осаждающий буфер 1 – для преципитации белков;
3.    Осаждающий буфер 2 – для преципитации НК;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса.

Инструкция по использованию

Скачать краткую инструкцию "Amex" (pdf)

Скачать полную инструкцию "Amex" (pdf)

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
2.    Центрифугировать пробирки в течение 3 минут при 13 тыс. об/мин, далее, не задевая осадок, удалить супернатант.
3.    К полученному осадку добавить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
4.    Повторить пункт 2.
5.    К полученному осадку клеток добавить 300 мкл лизирующего буфера и 15 мкл Протеиназы К, интенсивно встряхнуть на вортексе до полного разрушения конгломерата клеток.
6.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 25 минут, периодически встряхивая.
7.    Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
8.    Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания пробирок.

Сорбция и осаждение НК

1.    Добавить к смеси 50 мкл осаждающего буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в течение 3-5 минут на льду или в холодном штативе, периодически перемешивая образцы. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести 300-330 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6.    Добавить 330 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью многократного переворачивания пробирки.
Опционально: для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать пробирки в морозильной камере при -20℃ не менее 25 минут.
7.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.

Промывка НК

1.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2,3.
6.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.

Элюция НК

1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2.    Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая на вортексе.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «Amex» могут храниться при температуре от +4 до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.

Необходимые материалы и оборудование

  1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
  2. Штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  3. Автоматические дозаторы переменного объема на 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники; вортекс;
  4. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  5. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин;
  6. Штатив-охладитель или ледогенератор.
Made on
Tilda