Лизис1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
2. Центрифугировать пробирки в течение 3 минут при 13 тыс. об/мин, далее, не задевая осадок, удалить супернатант.
3. К полученному осадку добавить 1,5-2 мл амниотической жидкости.
4. Повторить пункт 2.
5. К полученному осадку клеток добавить 300 мкл лизирующего буфера и 15 мкл Протеиназы К, интенсивно встряхнуть на вортексе до полного разрушения конгломерата клеток.
6. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 25 минут, периодически встряхивая.
7. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
8. Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 1 минуты. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут до полного остывания пробирок.
Сорбция и осаждение НК
1. Добавить к смеси 50 мкл осаждающего буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать в течение 3-5 минут на льду или в холодном штативе, периодически перемешивая образцы. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 5-10 минут.
4. Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин.
5. Аккуратно, не задевая осадок, перенести 300-330 мкл супернатанта в новую пробирку объемом 1,5-2 мл.
6. Добавить 330 мкл осаждающего буфера 2 и перемешать с помощью многократного переворачивания пробирки.
Опционально: для увеличения выхода ДНК рекомендуется инкубировать пробирки в морозильной камере при -20℃ не менее 25 минут.
7. Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
Промывка НК
1. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
3. Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при 13 тыс. об/мин, после чего удалить супернатант.
4. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5. Повторить пункты 2,3.
6. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 42℃ или в центрифуге-концентраторе при 30℃ до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5 минут, периодически перемешивая на вортексе.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.
вернуться в каталог товаров