Набор реагентов для выделения ДНК из цельной крови «GM Blood E»

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1. Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2. Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
3. Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
4. Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5. Промывочный буфер 4 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6. Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7. Магнитные частицы – для сорбции НК.

Скачать краткую инструкцию «GM Blood E» (pdf)

Скачать полную инструкцию «GM Blood E» (pdf)

Лизис
1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 200 мкл крови и добавить 400 мкл лизирующего буфера.
2. Встряхнуть пробирки на вортексе. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать в термостате при 70℃ в течение 10 минут, периодически встряхивая.
4. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 мин до полного остывания пробирок.
Сорбция НК
1. Добавить в пробирки 60 мкл магнитных частиц.
2. Встряхнуть пробирки на вортексе. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин, периодически встряхивая.
4. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
5. Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 5 минут.
6. Аккуратно, не задевая магнитные частицы, удалить супернатант.
Промывка НК
1. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования, инкубировать на магнитном штативе в течение 2 минут.
3. Аккуратно, не задевая магнитные частицы, удалить супернатант.
4. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 2.
5. Повторить пункты 2,3.
6. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 3.
7. Повторить пункты 2,3.
8. Добавить в пробирки 700 мкл промывочного буфера 4.
9. Повторить пункты 2,3.
10. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ в течение 7 минут, либо при комнатной температуре в течение 15 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 5-10 минут, периодически перемешивая.
4. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
5. Инкубировать на магнитном штативе в течение 2 минут.
6. Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствует ≥1,7.

Буферы набора «GM Blood E» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.

Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл; штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл; автоматические дозаторы переменного объема на 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники; вортекс; твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл; магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл; скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин (опционально).