Проведение процедуры выделения метагеномной ДНК
Лизис 1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 100 мг исследуемых проб почвы.
2. К каждой навеске добавить 400 мкл деионизированной воды, исключая жидкие почвы (в т.ч. ил).
3. Добавить к образцам 400 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
4.
Интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
5. Инкубировать пробирки в термостате при температуре 56℃ в течение 1-2 часов, периодически перемешивая.
6. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
7. Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 3 минут. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин до полного остывания смеси.
Сорбция НК1. Добавить к смеси 350 мкл связывающего буфера.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут.
4. Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при макс. об/мин.
5. Аккуратно, не задевая осадок, перенести супернатант в новые пробирки.
6. Повторить пункты 4-5.
7. Добавить в пробирки 50 мкл магнитных частиц, интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
Рекомендация: добавить 240 мкл изопропанола для повышения сорбции деградированной ДНК.
8. Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, периодически перемешивая.
9. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
10. Инкубировать на магнитном штативе в течение 5 минут.
11. Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
Промывка НК1. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 2.
5. Повторить пункты 2-3.
6. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 3.
7. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
8. Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
9. Повторить пункты 6-8.
10. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 4.
11. Повторить пункты 7-8.
12. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при температуре 56-60℃ в течение 5-10 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера.
2. Интенсивно перемешать на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать в термостате при температуре 56-60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая.
4. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
5. Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 3-5 минут.
6. Аккуратно, не задевая частицы, перенести элюат в новые пробирки.
вернуться в каталог товаров