Проведение процедуры выделения ДНК
Лизис1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 200 мкл цельной крови.
2. Добавить 200 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
3. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4. Инкубировать в термостате при 56-60℃ в течение 10 минут, периодически встряхивая. Остудить смесь при комнатной температуре в течение 3-5 минут.
Сорбция и осаждение НК1. Добавить к смеси 200 мкл связывающего буфера, интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
2. Перенести весь объем смеси в спин-колонку.
3. Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при 8-10 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
Промывка НК1. Добавить в пробирки 650 мкл промывочного буфера 1.
2. Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при 8-10 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
3. Добавить в пробирки 650 мкл промывочного буфера 2.
4. Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при 8-10 тыс. об/мин. Удалить фильтрат из собирательных пробирок.
5. Вернуть колонки в собирательные пробирки. Центрифугировать пробирки в течение 1 минуты при макс. об/мин.
Элюция НК1. Перенести спин-колонки в новые пробирки объемом 1,5-2 мл. Собирательные пробирки утилизировать.
2. Добавить на центр мембраны спин-колонок 50-100 мкл элюирующего буфера. Инкубировать в течение 1-2 минут.
3. Центрифугировать пробирки в течение 30 секунд при макс. об/мин.
4. Утилизировать спин-колонки.
Опционально: для повышения выхода НК фильтрат необходимо повторно нанести на мембрану колонки и/или использовать нагретый до 60-70℃ элюирующий буфер.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения на А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.
вернуться в каталог товаров