Набор реагентов для выделения ДНК из проб костной и зубной тканей «Bone M»

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе хаотропных агентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Осаждающий буфер – для преципитации белков и декальцинации;
3.    Связывающий буфер – для повышения сорбции НК на магнитных частицах;
4.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от органических примесей и солей;
5.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от органических примесей и солей;
6.    Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от органических примесей и солей;
7.    Промывочный буфер 4 – для промывки нуклеиновых кислот от органических примесей и солей;
8.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
9.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
10. Магнитные частицы – для сорбции НК.

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
1.    В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить 50 мг измельченных исследуемых проб.
2.    Добавить к образцам 400 мкл лизирующего буфера и 20 мкл Протеиназы К.
3.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать пробирки в термостате при 56℃ в течение 1-2 ч, периодически перемешивая.
5.    Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
6.    Поместить пробирки на лед или в холодный штатив и инкубировать в течение 3 минут. В случае отсутствия охладительных элементов инкубировать при комнатной температуре в течение 10 мин до полного остывания смеси.
Сорбция НК
1.    Добавить к смеси 350 мкл осаждающего буфера.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, периодически перемешивая.
4.    Центрифугировать пробирки в течение 5 минут при макс. об/мин.
5.    Аккуратно, не задевая осадок, перенести супернатант в новые 1,5-2 мл пробирки.
6.    Повторить пункты 4-5.
7.    Добавить в пробирки 240 мкл связывающего буфера и 50 мкл магнитных частиц, интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
8.    Инкубировать при комнатной температуре в течение 5 минут, периодически перемешивая.
9.    Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
10. Инкубировать на магнитном штативе в течение 5 минут.
11. Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.
Промывка НК
1.    Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно, не задевая частицы, удалить супернатант.
4.    Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2-3.
6.    Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 3.
7.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
8.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
9.    Повторить пункты 6-8.
10. Добавить в пробирки 500 мкл промывочного буфера 4.
11. Повторить пункты 7-8.
12. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при температуре 56-60℃ в течение 5-10 минут до полного испарения промывочного раствора.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 25-50 мкл элюирующего буфера.
2.    Интенсивно перемешать на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать в термостате при температуре 56-60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая.
4.    Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
5.    Инкубировать пробирки на магнитном штативе в течение 3-5 минут.
6.     Аккуратно, не задевая частицы, перенести элюат в новые пробирки.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и до двух лет при температуре -20℃. По соотношению показателей поглощения А260/А280 чистота полученного раствора ДНК соответствуют ≥1,7.

Скачать краткую инструкцию "BoneM" (pdf)

Скачать полную инструкцию "BoneM" (pdf)

  

 

вернуться в каталог товаров

Буферы набора «Bone M» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при минимальных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Фермент Протеиназа К необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев. Допускается кратковременное повышение температуры хранения (транспортировки) фермента Протеиназа К от +4℃ до +25℃ не более 5 суток.