Проведение процедуры выделения ДНК
Лизис- В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить исследуемые образцы.
- В случае хранения образцов в физиологическом растворе необходимо центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 000 об/мин, после чего полностью удалить супернатант. В случае хранения биоматериала в этиловом спирте образцы необходимо вымачивать в воде не менее 30 минут. Затем центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 000 об/мин, после чего полностью удалить супернатант.
- Добавить к образцам 400 мкл лизирующего буфера и 30 мкл Протеиназы К, перемешать, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
- Инкубировать образцы в термостате при 60℃ не менее 3-x часов. Рекомендуется инкубировать образцы в течение ночи для более полного лизиса ткани и большего выхода НК.
- Добавить к образцам 300 мкл связывающего буфера и центрифугировать образцы при макс. об/мин в течение 3 минут. После чего аккуратно перенести максимальный объём супернатанта, не задевая осадок ткани, в новые пробирки объёмом 1,5-2 мл.
- Добавить к образцам 5 мкл РНКазы А, аккуратно перемешать, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
- Инкубировать образцы в течение 15 минут при комнатной температуре.
Сорбция НК- Добавить в пробирки 300 мкл связывающего буфера и 100 мкл магнитных частиц, перемешать.
- Инкубировать образцы в течение 5 минут при комнатной температуре, периодически перемешивая.
- Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
- Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно удалить супернатант, не задевая осадок магнитных частиц.
Промывка НК1. Добавить 600 мкл промывочного буфера 1.
2. Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3. Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 1 минуты, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4. Добавить 600 мкл промывочного буфера 2.
5. Повторить пункты 2-3.
6. Добавить 600 мкл промывочного буфера 3.
7. Повторить пункты 2-3.
8. Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ или при комнатной температуре до полного испарения промывочного буфера 3.
Элюция НК1. Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера, интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
2. Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая.
3. Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4. Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 3 минут.
5. Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и более длительное время при температуре -20℃.
вернуться в каталог товаров