Набор реагентов для выделения ДНК из сложных образцов тканей животных "Tissue Strong"

Raissol
8000,00
р.
КУПИТЬ СЕЙЧАС
Набор реагентов предназначен для выделения ДНК из сложных образцов биоптатов и спиртовых препаратов тканей животных, в т.ч. членистоногих и пр. Специально разработанный лизис позволяет высвободить НК даже из денатурированных структур белков, однако требует повышенного времени лизиса, а сорбция НК на магнитных частицах позволяет минимизировать риск потери НК на этапах промывок, свойственный классическим методам осаждения НК.

Тип образца: Ткани

Состав набора
Инструкция по использованию
Условия хранения
Необходимые материалы и оборудование

Состав набора

В набор включены все необходимые реагенты для выделения ДНК:
1.    Лизирующий буфер – на основе детергентов и вспомогательных компонентов для оптимального лизиса;
2.    Связывающий буфер – для сорбции НК на магнитных частицах;
3.    Промывочный буфер 1 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
4.    Промывочный буфер 2 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
5.    Промывочный буфер 3 – для промывки нуклеиновых кислот от клеточных метаболитов и солей;
6.    Элюирующий буфер – для элюции и хранения НК, pH=8,9;
7.    Протеиназа К – для более быстрого и полного лизиса;
8.    РНКаза А – для удаления РНК;
9.    Магнитные частицы – для сорбции НК.

Инструкция по использованию

Проведение процедуры выделения ДНК

Лизис
  1. В пробирки объемом 1,5-2 мл поместить исследуемые образцы.
  2. В случае хранения образцов в физиологическом растворе необходимо центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 000 об/мин, после чего полностью удалить супернатант. В случае хранения биоматериала в этиловом спирте образцы необходимо вымачивать в воде не менее 30 минут. Затем центрифугировать образцы в течение 5 минут при 13 000 об/мин, после чего полностью удалить супернатант.
  3. Добавить к образцам 400 мкл лизирующего буфера и 30 мкл Протеиназы К, перемешать, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
  4. Инкубировать образцы в термостате при 60℃ не менее 3-x часов. Рекомендуется инкубировать образцы в течение ночи для более полного лизиса ткани и большего выхода НК.
  5. Добавить к образцам 300 мкл связывающего буфера и центрифугировать образцы при макс. об/мин в течение 3 минут. После чего аккуратно перенести максимальный объём супернатанта, не задевая осадок ткани, в новые пробирки объёмом 1,5-2 мл.
  6. Добавить к образцам 5 мкл РНКазы А, аккуратно перемешать, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
  7. Инкубировать образцы в течение 15 минут при комнатной температуре.
Сорбция НК
  1. Добавить в пробирки 300 мкл связывающего буфера и 100 мкл магнитных частиц, перемешать.
  2. Инкубировать образцы в течение 5 минут при комнатной температуре, периодически перемешивая.
  3. Сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
  4. Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 2 минут. Аккуратно удалить супернатант, не задевая осадок магнитных частиц.
Промывка НК
1.    Добавить 600 мкл промывочного буфера 1.
2.    Интенсивно перемешать пробирки на вортексе, сбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
3.    Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 1 минуты, после чего аккуратно, не задевая осадок частиц, удалить супернатант.
4.    Добавить 600 мкл промывочного буфера 2.
5.    Повторить пункты 2-3.
6.    Добавить 600 мкл промывочного буфера 3.
7.    Повторить пункты 2-3.
8.    Высушить образцы с открытыми крышками в термостате при 56-60℃ или при комнатной температуре до полного испарения промывочного буфера 3.
Элюция НК
1.    Добавить в пробирки 50-100 мкл элюирующего буфера, интенсивно перемешать пробирки на вортексе.
2.    Инкубировать в термостате при 60℃ в течение 10 минут, периодически перемешивая.
3.    Cбросить капли с помощью кратковременного центрифугирования.
4.    Инкубировать образцы на магнитном штативе в течение 3 минут.
5.    Перенести элюат в новые пробирки объемом 1,5-2 мл.
Опционально: рекомендуется провести дополнительное центрифугирование элюата на максимальной скорости для удаления остаточного количества магнитных частиц.
Полученные растворы нуклеиновых кислот могут храниться до 7 дней при температуре от +2℃ до +4℃ и более длительное время при температуре -20℃.

Скачать краткую инструкцию "TissueStrong" (pdf)

Скачать полную инструкцию "TissueStrong" (pdf)

 

вернуться в каталог товаров

Условия хранения

Буферы набора «Tissue Strong» могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. В случае наличия осадка при пониженных температурах хранения, растворы следует нагреть до комнатной температуры.
Магнитные частицы могут храниться при температуре от +4℃ до +25℃ в течение 12 месяцев с даты выпуска изготовителя. Перед применением суспензию частиц необходимо тщательно взбалтывать до однородного состояния.
Ферменты Протеиназа К и РНКаза А необходимо хранить при -20℃, срок хранения составляет 12 месяцев.

Необходимые материалы и оборудование

  1. Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5-2 мл;
  2. Магнитный штатив для микроцентрифужных пробирок объемом 1,5-2 мл;
  3. Автоматические дозаторы переменного объема на 2-20 мкл, 20-200 мкл, 100-1000 мкл и соответствующие одноразовые наконечники;
  4. Вортекс;
  5. Твердотельный термостат с возможностью поддержания температурного режима в диапазоне 25-80ºС для пробирок объемом 1,5-2 мл;
  6. Скоростная микроцентрифуга для пробирок объемом 1,5-2 мл до 13 тыс. об/мин.
Made on
Tilda